4 Enzyme cắt ghạn RE
Các enzyme có khả năng hạn chế sự pt of phage trong tb vk bằng cách fan hủy adn of phage 1 cách đặc hiệu gọi là enzyme cắt giới hạn(RE).
DD,TÍNH CHẤT
RE fan hủy bất kỳ adn ngoại lai nào xâm nhập vào tb vk.Để ngăn ngừa enzyme này tác dụng vào adn của tb chủ enzyme sửa đổi of hệ thống sủa đổi adn vật chủ bằng cáh metyl hóa các base xác định trong trình tự nhận biết nhờ vậy ngăn cản RE cắt vào adn of tb chủ.
RE có đặc tính k cắt adn đặc hiệu loài.Nghĩa là RE tách chiết từ vk có thể cắt adn of tbdv,tv,vk khác ở cùng 1 vị trí giới hạn or điểm giới hạn.Số lượng và kích thước doạn cắt dài or ngắn tùy thuộc vào số lượng điểm giới hạn trên fan tử adn.
RE có 3 kiểu I,II,III.Các enzyme đc dùng fo biến thuộc kiểu II,cớ chế tác dụng đơn jan.Chúng la các nuclease và vì chúng cắt tại vị trí nằm bên trong sợi adn nên gọi la các endonuclease.
Các RE nhận biết adn mạch kép ở những trình tự điểm nhận biết và cắt adn ở ngay điểm này or điểm kế cận.Các trình tự nhận biết thường có trình tự 4-6 cặp nucleotide đôi khi tới 8 cặp nucleotide
Mỗi enzyme giới hạn nhận biết và cắt đặc hiệu 1 đoạn adn ở những vị trí nhất định.Có 2 kiểu cắt khác nhau là cắt tạo đầu bằng và cắt tạo đầu dính.
VAI TRÒ
Nếu vị trí cắt of RE ở giữa trình tự nhận biết thì tạo nên chuỗi adn đầu =,các đầu = bị cắt of pTử adn k có khả năng tự kết hợp lại với nhau.Để nối các đoạn adn với nhau cần sử dụng enzyme nối or các đoạn nối(linkers) or các adaptor chuyên dụng cho mỗi loại enzyme.Nếu vị trí cắt nằm cạnh trình tự nhận biết thì tạo ra đầu sole.Các đầu sole tạo nên sau khi cắt có thể tự nối lại với nhau k cần sự có mặt of enzyme nối.Nhờ đặ tính này RE tạo các đoạn adn các đầu sole đc use nhiều trong kĩ thuật adn tái tổ hợp
Các pTử adn khác nhau đc cắt bởi cùng 1 loại enzyme ghạn or khả năng kết hợp với nhau tạo nên các pTỦ adn tái tổ hợp qua các điều chỉnh.Các đoạn adn đc tạo ra nhờ hoạt tính cắt tạo đầu dính of enzyme ghạn có thể tự nối với những đoạn adn có các đầu tương tự nên đc use rất nhiều trong kt adn tái tổ hợp.
HIện nay có khoảng 3000 RE: EcoRI,EcoRV,BamHI,SmaI...
Bạn đang đọc truyện trên: Truyen2U.Net